技术服务

稳转细胞株构建

技术原理与实验步骤

稳转细胞株构建一般是通过慢病毒方法构建的。构建慢病毒包装需要的表达质粒及包装质粒,用转染试剂将质粒转染到293T等病毒包装细胞中可完成病毒包装。包装好的慢病毒感染细胞后,会将目的表达基因整合到细胞基因组中,实现稳定表达,通过表达载体上的筛选基因如荧光、抗生素等可实现阳性细胞筛选。本公司拥有荧光蛋白Venus、mCherry、mKate、GFP、EYFP等质粒,运用慢病毒包装系统包装慢病毒,感染CHO、Hela、客户需求细胞,可构建用于检测基因表达、蛋白定位相关的荧光蛋白融合细胞株及检测蛋白相互作用及药物筛选的双分子荧光互补细胞株。

参考文献

Monitoring G protein-coupled receptor activation using an adenovirus-based b-arrestin bimolecular fluorescence Q1 complementation assay. Analytical Biochemistry, 2013.

 

服务流程

  1. 客户提供基因信息及需求;
  2. 选择合适的表达质粒载体,合适的荧光蛋白,合理的荧光蛋白拆分位点,分子克隆构建质粒;
  3. 构建成功的表达质粒与包装质粒共转染293T细胞;
  4. 收集病毒,荧光细胞计数法测定病毒滴度;
  5. 病毒感染CHO、Hela或客户需求细胞,荧光检测并用流式细胞仪分选;
  6. 根据客户对稳转细胞株的要求如体积、细胞数等提供细胞株,附加质粒构建引物、测序结果、细胞荧光检测、流式细胞仪分选结果等信息。