技术服务

分子生物学技术服务-质粒构建

技术原理与实验步骤

质粒是广泛存在于细菌、放线菌、酵母菌等生物中,赋予这些生物抗药、抗重金属等特性,对质粒进行有目的的改造后可以用于目的基因的片段扩增、目的基因的特异表达等,已经成为现代生物学必不可少的工具。

 

质粒的构建主要用到常用的分子生物学实验如PCR、限制性核苷酸酶切、DNA连接酶连接、转化大肠杆菌感受态细胞等。PCR用来扩增目的基因片段,涉及引物设计、退火温度的摸索、DMSO浓度优化等多种过程,快速准确的PCR对质粒构建过程有重要影响,然而有的基因片段由于GC含量高、含有特殊结构等,在进行PCR时特别困难;质粒载体改造需要进行各种目的基因片段的酶切、连接等过程,是很耗时的过程。

 

晶诺生物有专业的研究人员,从事分子生物学研究多年,对质粒构建富有经验,可在短时间内高效率的完成构建过程。在产品研发的过程中,积累了丰富的质粒构建经验,尤其擅长结核菌、荧光互补、融合蛋白等相关领域的质粒构建,可根据顾客需求提供相关技术服务。

结核杆菌基因PCR及质粒构建:

对基因组高GC含量的结核菌PCR有独特的方法和丰富的经验,可高效率地完成高难度基因PCR,根据客户提供的载体信息,选择合适的酶切位点,经酶切连接后构建需求质粒。

 

荧光互补技术(BiFC)质粒构建:

拥有Venus、mCherry、mKate、GFP、EYFP等多种荧光蛋白质粒,荧光蛋白合理的拆分并与目的蛋白相连,可用于研究蛋白相互作用,根据客户需求,可提供荧光标记质粒及研究蛋白相互作用的BiFC质粒。

 

融合蛋白表达质粒构建:

融合蛋白是两个蛋白通过柔性多肽linker相连,具有两个蛋白的功能,并可能具有额外的优势,如激活新的信号通路、特异的细胞靶向性等,在新药物开发中有广阔的前景,我们已经构建并表达了GMCSF-IL4、IL4-GMCSF、GMCSF-IL10、IL10-GMCSF等多种融合蛋白质粒,经验丰富,根据客户提供的基因、载体信息,我们可提供需求融合蛋白表达质粒。

 

服务流程:

  1. 客户提供目的基因及载体信息及需求
  2. 设计引物,进行PCR,PCR产物、载体进行酶切并连接转化,挑取菌落提取质粒测序
  3. 发送产品:构建好的阳性菌液及质粒,相关的引物信息,PCR、酶切电泳图,测序结果。

服务周期:1-2周