技术服务

蛋白生物学技术服务-原核表达

技术原理与实验步骤

将目的基因片段连接至合适的原核表达载体后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株内,随后利用菌自身的蛋白表达系统通过温度和诱导剂的控制,诱导其在宿主菌内表达目的蛋白质,将表达样品进行SDS-PAGE 以检测表达蛋白质。原核表达系统是至今为止最为成熟可靠的蛋白表达系统,其优点是实验周期短、成本低、产量高。

 

优势

队伍专业,熟练掌握密码子优化、载体构建、等电点分析、表达纯化、包涵体变性复性等操作,在蛋白表达纯化及发酵生产实战经验丰富;仪器完备,拥有蛋白纯化所需的离子柱、分子筛、亲和柱、疏水柱、AKTA purifier系统。

 

密码子优化

根据原核细胞蛋白表达密码子偏好进行密码子优化,完善蛋白表达,解决蛋白无法表达及包涵体蛋白等问题。

 

原核表达

构建原核表达质粒,转化到BL21感受态细胞,IPTG诱导表达。

 

包涵体变性复性

蛋白在原核细胞中表达后,有时无法分泌到细胞质中,而是以包涵体的形式存在,无法从上清中获取,需收集包涵体,对包涵体进行变性复性,获取目的蛋白。

 

纯化

蛋白表达纯化专业人员,对研究蛋白进行等电点分析、疏水性分析等,丰富的经验,熟练的队伍,快速优质的纯化蛋白。

 

内毒素检测及去除

内毒素是菌体破裂后产生的毒素,主要成分是类脂质A,会引发人体发热、休克、白细胞反应等免疫反应,对于药用蛋白产品,需将内毒素清除,否则会引发安全问题。

 

服务流程

  1. 依据客户提供的蛋白基因、载体要求,设计克隆方案,构建原核表达载体。可提供6xHis、GST、MBP等携带标签及肠激酶、凝血酶等蛋白酶切除标签蛋白的表达载体,提供多种选择;
  2. 将构建好的质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株内,优化温度、IPTG浓度等条件诱导蛋白表达,SDS-PAGE验证;
  3. 对蛋白性质进行分析,选择合适的方法分离纯化蛋白;
  4. 依据客户要求如蛋白纯度、是否需要带标签、带何种类型的标签、蛋白溶解缓冲液要求,是否冻干等提供最终蛋白产品,附加载体构建报告、SDS-PAGE检测报告、目的基因质粒、重组细菌菌株、重组表达菌株等信息。