技术服务

分子生物学技术服务-DNA Shuffling技术

技术原理与实验步骤

DNA Shuffling技术最早由Stemme于1994年提出,是将多种类型的具有同源序列的DNA混合后经DNase或超声波处理后随机断裂成小片段寡核苷酸片段,不加引物使同源片段互为模板进行PCR,PCR后纯化回收后作为DNA模板,加引物做常规PCR后得到突变后的目的DNA,DNA Shuffling实现DNA分子的进化,可用于蛋白、酶、抗体、细胞因子、工程菌的优化。

服务流程:

  1. 客户提供基因名称、样品等
  2. 设计常规PCR引物
  3. DNase酶切或超声处理,得到随机寡核苷酸片段
  4. 寡核苷酸片段混合,互为模板做无引物PCR
  5. 无引物PCR后纯化回收,做常规PCR
  6. 纯化PCR,酶切连接到载体上,挑选单克隆,测序
  7. 发送结果:单克隆菌液,测序结果