技术服务

Crispr-Cas9基因敲除

技术原理与实验步骤

CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是基因敲除领域的重大新技术,由细菌和古细菌针对外源基因的获得性免疫防御机制的启发,设计转录后能与基因组特定核苷酸序列互补配对的gRNA指导Cas核酸酶进行基因定向修饰,在靶定位点剪切双链DNA,随后通过宿主自身的DNA修复机制修复,从而达到修饰基因组DNA的目的。在人、鼠、猴、植物、细菌等多种生物中广泛应用。

技术特点

1.技术成熟,系统灵活简单,敲除效率高;

2.无种属限制,适用于各种细胞系的靶向敲除;

3.可实现多个靶基因位点及多个基因的同时敲除;

4.服务周期短,2个月即可交付阳性细胞。

 

参考文献

Genome engineering using the CRISPR-Cas9 system. Nat Protoc. 2013 November; 8(11): 2281–2308.

 

服务流程

  1. 客户提供敲除信息,如敲除细胞类型、基因等;
  2. 靶向目标序列gRNA的设计及载体构建,筛选阳性菌株,提取质粒;
  3. 目标细胞系转染;
  4. 阳性细胞株的筛选和鉴定;

根据客户需求如细胞数目、体积等提交阳性细胞,附加引物、测序结果等信息。